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細胞因子在體內具有重要的病理作用
點擊次數:1021 更新時間:2022-11-08
    細胞因子在體內具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態下,部分細胞因子會明顯變化,根據這些指標可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應評價,具有重要的應用價值。廣泛應用于細胞生物學、免疫學以及腫瘤學等領域的流式細胞術是細胞因子檢測的一種方法。
  CBA(cytometric bead array)法是新發展起來的利用流式細胞術測定細胞因子的新方法,該方法直接檢測分泌到細胞外的處于游離狀態的細胞因子。流式細胞術不能直接檢測細胞因子,CBA技術利用人工合成的微球(如直徑為7.5µm的聚苯乙烯微球)代替細胞,在該做球上包被細胞因子抗體,當待測樣品中含有相應的細胞因子時,人工微球上的抗體能夠與細胞因子結合,然后再加入PE偶聯的抗細胞因子抗體,該PE偶聯抗體就可以與微球上結合的細胞因子結合,形成“三明治夾心”結構。其基本原理與ELISA法檢測細胞因子具有相似之處,只是ELISA法利用的是酶系統,通過使底物顯色,計算顏色的深淺來定量細胞因子,而CBA能利用的是熒光系統,通過激發PE熒光素,分析熒光信號的強弱來定量細胞因子。
  CBA穩定性好、可重復性高,能避免酶聯免疫放大技術使信號失真導致的假陽性。
  流式細胞術檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復性好并能準確定量的方法。但由于胞內分析步驟復雜,涉及變異因素多,可能會出現結果不穩定,較難重復等問題。
  如在檢測血清時,由于血清成分復雜,細胞因子含量差距大,實驗中經常會出現分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現象,對實驗結果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒有充分渦旋,容易沉淀聚集,細胞因子不能充分跟微球結合,導致多群甚至聚集現象發生,檢測結果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管,直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發生聚集。

滬公網安備 31011802001676號

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