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兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒說明書
點擊次數:995 更新時間:2021-04-14

  

 /鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒說明書

    SPRabbit&MouseHRPKit

    Cat.No.K0120

    保存:2-8

 

*本試劑盒僅適用于一抗為兔源或鼠源抗體的IHC實驗

 

    產品簡介

 

      本試劑盒根據生物素(Biotin)與鏈霉親和素(Streptavidin)具有很強親和力的原理設計。在兔源或鼠源的一抗與相應的靶抗原結合后,本試劑盒中的生物素化抗·兔/鼠通用型二抗與一抗特異結合;二抗上標記的生物素與標記了過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP標記的鏈霉親和素復合物。HRP可以催化底物顯色,從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP,均采用優化的標記和純化技術,使得其染色有更高靈敏度和更低的背景,適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片,以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮制備的血涂片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒適合與上海研謹生物即用型或濃縮型抗體配套使用。試劑盒不包括酶底物顯色劑,請另行購買與過氧化酶適配的DABAEC顯色系統。

 

注意事項

 1.每張切片加入1滴(約50μl)計算,3ml可做60張切片,18ml可做360張切片。

2.于內源性生物素含量比較豐富的組織,使用本試劑盒時最+*好用內源性生物素阻斷劑進行封閉。

3.實驗過程中避免組織片干燥,因此各步孵育時工作液用量必需充足,保證*覆蓋組織樣本,且盡量在濕盒中進行孵育。

4.為獲得最+*佳實驗結果,請務必優化實驗條件及試劑用量。

5.  本產品僅用于科研,不能用于人體反應或人體治療。  

 

使用方法

 1.  常規處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。

1)組織切片或細胞爬片染色前處理:

a.石蠟切片

         脫蠟水化:60ºC烤片1小時,二甲苯脫蠟二次,每次5分鐘;再依次浸入梯度乙醇(無水乙醇-無水乙醇-95%85%75%乙醇)和蒸餾水中各5分鐘水化。

 b.冰凍切片和細胞爬片

切片(或爬片)浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織(或細胞)浸潤15分鐘,0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鐘。

 2)石蠟切片的抗原修復:絕大大多數情況下,石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復都是適合的。修復工作液配制:1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復液,100×)Cat#YJ0128),混勻即可。修復過程:修復液加入高壓鍋內,待修復切片浸于修復液中(必需沒過組織),蓋上壓力鍋蓋,加熱至均勻噴汽,

 從噴汽開始計時,1~2分鐘后壓力鍋離開熱源,自然冷卻至室溫,取出切片,蒸餾水淋洗后,再用PBS0.01MpH7.4)漂洗2次,每次3分鐘。

 2.  滴加適量試劑1(內源性過氧化物酶封閉液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

3.  滴加適量試劑2(封閉用正常羊血清工作液),室溫孵育10分鐘,甩干。

4.  滴加適量一抗工作液(商品化即用型抗體或適當比例稀釋的濃縮抗體),按實驗要求孵育,然后PBS充分淋洗。

5.  滴加適量試劑3(生物素標記羊抗兔/鼠二抗工作液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

6.  滴加適量試劑4HRP標記的鏈霉親和素),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

7.  滴加顯色工作液顯色(DABAEC)。

8.  復染,脫水透明,封片。

 

HE染色

免疫組化IHC染色實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

滬公網安備 31011802001676號

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